Inicio  » Revista Veterinaria REDVET  » Vol 17 Nº 12 Diciembre 2016

121606 - Caracterización in vitro e in vivo de tres hibridomas de interés veterinario

Autor

Dany Miranda, Isi Veitía, Emilio Carpio, Joel Pérez, Maylin Pérez-Bernal*, Reinaldo Blanco, Carlos Hernández, Yeleiny Machín, Duniesky Martínez, Liudmila Benítez, Adaleikys Marrero, Yanisleidy Reyes, Alexander Cruz.
Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología de Sancti Spíritus, Apartado Postal 83, Sancti Spiritus, Cuba. 

Fecha de publicación

26/12/2016

Resumen

Se caracterizaron los hibridomas CBSSHA.2, CBSSBm.1 y CBSSE2.1, que secretan anticuerpos monoclonales contra las proteínas hemaglutinina del virus de la Influenza Aviar, Bm86 de la garrapata Rhipicephalus (Boophilus) microplus y E2 del virus de la Peste Porcina Clásica, respectivamente. Se determinó la clase, subclase y el tipo de cadena ligera de los anticuerpos secretados. Se evaluó in vitro la viabilidad, concentración celular, el crecimiento exponencial y tiempo de duplicación. Para el diseño in vivo se emplearon tres grupos de ratones Balb/c inoculados con: 1x106, 2x106 ó 3x106 cél/mL. Se estudió el efecto de la cantidad de células sobre la formación de tumores, la mortalidad y producción de ascitis. A los sobrenadantes de cultivo y las ascitis se les determinó por ELISA la concentración de IgG. Se evaluó la influencia de las cantidades de células inoculadas sobre los volúmenes de ascitis y la concentración de anticuerpos. La viabilidad, concentración celular, el crecimiento exponencial y tiempo de duplicación se correspondieron con lo descrito en la literatura para otros hibridomas. Existió alta correlación entre las concentraciones de IgG en sobrenadantes de cultivo y en las ascitis. Los hibridomas estudiados formaron tumores líquidos en más del 90% de los ratones inoculados, con una mortalidad inferior al 10%. Los valores promedios de concentración de IgG en ascitis del hibridoma CBSSE2.1 difirió significativamente según el inóculo empleado. La capacidad de secreción in vitro e in vivo del hibridoma CBSSBm.1 fue inferior a los demás hibridomas.

Abstract

It were characterized the hybridomas CBSSHA.2, CBSSBm.1 and CBSSE2.1, which secrete monoclonal antibodies against the proteins hemaglutinin from Avian Influenza virus,  Bm86 from Rhipicephalus (Boophilus) microplus and E2 from Classical Swine Fever virus, respectively. The class, subclass and light chain type of the antibodies were determined. The viability, cell concentration and exponential growth were evaluated in vitro. In vivo design required three groups of Balb/c mices, inoculated with 1x106, 2x106 ó 3x106 cél/mL, for study the effect of cell concentration on tumor formation, mortality and ascite production. The IgG concentrations in culture supernatants and ascites were determined by ELISA. It was evaluated the effect of inoculated cells on ascite volumes and antibody concentration. The results obtained in parameters of viability, cell concentration, exponential growth and duplication time corresponded with literature descriptions for other hybridomas. The IgG concentrations in culture supernatants and ascites were highly correlated. All hibridomas formed liquid tumors in more than 90% of inoculated mices, and the mortality was less than 10%. IgG concentration in ascite from CBSSE2.1 hybridoma depended on inoculum. In vitro and in vivo secretion of CBSSBm.1 was lesser in respect to CBSSHA.2 and CBSSE2.1.

Artículo

Palabras clave

anticuerpos monoclonales| ascitis| concentración de IgG
ascite| IgG concentration| monoclonal antibodies


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